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在ELISA實(shí)驗結束后，我們得到的是經(jīng)酶標儀得出的標準品以及樣本的OD值。其中，標準品的濃度已知，我們可以利用標準品的OD值及其相對應的濃度，以 OD值為橫坐標，濃度為縱坐標，做一條標準曲線(xiàn)，并用公式表示出來(lái)。這樣，我們把樣本的OD值以X值代入，便可求出Y值，即樣本濃度。
1、首先，將數據整理好輸入Excel，分別為經(jīng)酶標儀讀出標準品的OD值及其對應的濃度值。 

2、拖動(dòng)鼠標選取完成的數據區，并點(diǎn)擊圖表向導，在圖表類(lèi)型中選“XY散點(diǎn)圖”，并選擇子圖表類(lèi)型的“散點(diǎn)圖”（第一個(gè)沒(méi)有連線(xiàn)的），如下圖所示。

3、點(diǎn)擊“下一步”，出現如下圖界面。如是輸入是如本例橫向列表的就不用更改，如果是縱向列表就改選“列”。

4、在做ELISA標準曲線(xiàn)，并通過(guò)此曲線(xiàn)求樣本濃度時(shí)，因樣本OD值是已知的，因此我們需要將OD值設為X。根據上圖我們可以看到，橫坐標X值為OD值，縱坐標Y為標準品濃度，這正是我們想要的。
有時(shí)需要我們手動(dòng)選擇X值，這時(shí)可以點(diǎn)擊“系列”來(lái)更改，如下圖。

如果要對橫坐標和縱坐標進(jìn)行調換，我們可以就點(diǎn)擊X值和Y值文本框右邊的小圖標，結果如下圖：

出現上圖后，拖動(dòng)鼠標選取正確的數據區域以調整X或Y。
5、調好之后，然后點(diǎn)擊“下一步”出現圖標選項界面，如下圖。

6、點(diǎn)擊“下一步”，在彈出的窗口再點(diǎn)擊“完成”，現在一張帶標準值的完整散點(diǎn)圖就已經(jīng)完成，如下圖。

7、到了這一步，散點(diǎn)圖便完成了。我們可能會(huì )問(wèn)，曲線(xiàn)在哪里??？
其實(shí)很簡(jiǎn)單，先點(diǎn)擊圖上的標準值點(diǎn)（記住一定要點(diǎn)選上），然后單擊右鍵，點(diǎn)擊“添加趨勢線(xiàn)”。彈出趨勢線(xiàn)類(lèi)型選擇對話(huà)框，有線(xiàn)性，對數，多項等選項，如下圖：

8、在選擇之前，我們先對上圖做一下肉眼觀(guān)察，如果那些點(diǎn)能連成一條直線(xiàn)，或接近直線(xiàn)，我們就選擇“線(xiàn)性”，意思就是出來(lái)的趨勢線(xiàn)是一條直線(xiàn)，相應的該直線(xiàn)的方程就是y=ax
+b 的形式。不過(guò)一般的ELISA都不會(huì )是所有的標準點(diǎn)呈完全的線(xiàn)性關(guān)系的，也就是說(shuō)不是一條完全的直線(xiàn)，這時(shí)我們可以選擇“多項式”，多項式后面還有“階 數”的選擇，也就是說(shuō)求出來(lái)的方程是幾次方，我們一般選“2階”，即出來(lái)的方程為y=ax2+bx+c. 選擇完畢后，彈出以下窗口。

9、 趨勢線(xiàn)也就是標準曲線(xiàn)在此便顯示出來(lái)了。接下來(lái)我們需要將公式顯示出來(lái)，以根據樣本的OD值計算其濃度值。在鼠標點(diǎn)選該線(xiàn)（一定要選中，選中后出現下圖的 樣子即線(xiàn)由很多店標識出來(lái)），單擊鼠標右鍵，選擇趨勢線(xiàn)格式。我們在彈出的窗口中選擇“選項”選項卡，出現下圖，我們選擇顯示公式，顯示R方，即相關(guān)系 數，這時(shí)公式與R方值便都顯示出來(lái)了。


我們將樣本的OD值作為X代入上述方程，求出來(lái)的便為濃度值了。
一般ELISA的標準曲線(xiàn)的相關(guān)系數要達到0.95以上，本例中為0.9999，非常不錯的曲線(xiàn)，這樣就保證了由該曲線(xiàn)及其方程求出的樣本濃度具有很強的可信性。