產(chǎn)品名稱(chēng)：超氧化物歧化酶(SOD)測試盒(WST-8法)
產(chǎn)品規格：50管/48樣,100管/96樣
產(chǎn)品貨號：LE-1-062,LE-2-062
產(chǎn)品報價(jià)：
免費咨詢(xún)：0551-66107970
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貨號 |
產(chǎn)品名稱(chēng) |
檢測方法 |
規格 |
售價(jià)（元） |
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LE-1-062 |
超氧化物歧化酶(SOD)測試盒(WST-8法) |
分光光度法 |
50管/48樣 |
400 |
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LE-2-062 |
超氧化物歧化酶(SOD)測試盒(WST-8法) |
微量法 |
100管/96樣 |
720 |
超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒說(shuō)明書(shū)(分光光度法)
貨號：LE-1-062
正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
SOD（EC 1.15.1.1）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養細胞中，催化超氧化物陰離子發(fā)生岐化作用，生成 H2O2 和 O2 。SOD 不僅是超氧化物陰離子清除酶，也是 H2O2 主要生成酶，在生物抗氧化系統中具有重要作用。
測定原理：
通過(guò)黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應系統產(chǎn)生超氧陰離子(O2-.)，O2-.可與 WST-8 反應產(chǎn)生水溶性 染料甲臜，后者在 450nm 處有吸收；SOD 可清除 O2-.，從而抑制了甲臜的形成；反應液黃色越深，說(shuō)明 SOD 活性愈低，反之活性越高。
需自備的儀器和用品：
分光光度計、離心機、移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水
試劑的組成和配制：
提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 50mL×1 瓶，4℃避光保存；
試劑二：液體 300μL×1 支，4℃避光保存；
試劑三：液體 100μL×1 支，4℃保存；
試劑四：粉劑×2 瓶，4℃保存。
粗酶液提?。?/span>
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104 個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000 ：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細菌或細胞加入 1mL 提 取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）； 8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1 ：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約 0.1g 組織， 加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、分光光度計預熱 30min 以上，調節波長(cháng)至 450nm ，蒸餾水調零。
2、試劑三的稀釋?zhuān)簩⒃噭┤谜麴s水稀釋 50 倍，用多少配多少。（試劑三和蒸餾水 1 ：49 稀釋。
3、工作液配制：在試劑一加入 250μL 試劑二，充分混勻。配好的試劑 4℃避光可保存一周。（若一次性測定樣本較少，可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照 20mL ：0.1mL 的比 例混勻配制）
4、將一瓶試劑四用 5mL 蒸餾水溶解（溶解后一周內用完）。
5、 樣本測定（在 1mL 玻璃比色皿中依次加入下列試劑）
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試劑名稱(chēng)(μL） |
測定管 |
對照管 |
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樣本 |
50 |
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蒸餾水 |
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50 |
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試劑三（稀釋后） |
50 |
50 |
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工作液 |
800 |
800 |
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試劑四 |
100 |
100 |
注意事項：
1、試劑三為酶，不可冷凍，使用時(shí)在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、SOD 為什么有的樣本測定管大于對照管，對照管數值在什么范圍？
對照管的范圍是 0.8-2。對照管吸光值過(guò)低可能是
（1）試劑三活性低，可以適當減少稀 釋倍數；
（2）沒(méi)有按順序加試劑；
（3）反應時(shí)間不夠，可以延長(cháng)反應時(shí)間（反應時(shí)間 30min 可以延長(cháng)到 40min）。
（4）對照管吸光值過(guò)高可能是試劑三未按操作說(shuō)明書(shū)稀釋相應倍數。
（5）若出現測定管大于對照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10 倍后再測，通?？梢允箿y定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數。
SOD 活性計算：
1、抑制百分率的計算
抑制百分率＝(A 對照管－A 測定管) ÷A 對照管×100%
盡量使樣本的抑制百分率在 10-90%范圍內。如果計算出來(lái)的抑制百分率小于 10%或大于 90%，則通常需要調整加樣量后重新測定。如果測定出來(lái)的抑制百分率偏高，則需將樣本用 提取液適當稀釋?zhuān)蝗绻麥y定出來(lái)的抑制百分率偏低，則需重新準備濃度比較高的待測樣本。
2 、SOD 酶活性單位：在上述黃嘌呤氧化酶藕聯(lián)反應體系中抑制百分率為 50%時(shí)，反應體系 中的 SOD 酶活力定義為一個(gè)酶活力單位(U/mL)。
3、SOD 酶活性計算：
（1）血清（漿）SOD 活性(U/mL)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V 反總]÷V 樣
=20×抑制百分率÷(1－抑制百分率)
（2）組織、細菌或培養細胞 SOD 活力計算：
a. 按樣本蛋白濃度計算
SOD 活性(U/mg prot)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V 反總]÷(V 樣×Cpr)
=20×抑制百分率÷(1－抑制百分率)÷Cpr
需要另外測定，建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。
b. 按樣本鮮重計算
SOD 活性(U/g 鮮重)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V 反總]÷(W ×V 樣÷V 樣總)
=20×抑制百分率÷(1－抑制百分率)÷W
c. 按細菌或細胞個(gè)數計算
SOD 活力(U/104 cell)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率) ×V 反總]÷(500×V 樣÷V 樣總) =0.04×抑制百分率÷(1－抑制百分率)
V 反總：反應體系總體積，1mL；V 樣：加入反應體系中樣本體積，0.05mL；V 樣總：加入 提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL ；W：樣本質(zhì)量，g；500：細胞或細菌 總數，500 萬(wàn)。
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